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        淺談蛋白保存

        更新時(shí)間:2025-05-14      瀏覽次數(shù):91

        作為實(shí)驗(yàn)室的"打工人",相信大家都經(jīng)歷過(guò)這樣的崩潰時(shí)刻:好不容易純化出來(lái)的蛋白,放冰箱幾天后居然沉淀了!或者不同批次的蛋白活性忽高忽低,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)根本沒(méi)法看...今天我們就來(lái)聊聊這個(gè)讓老師們頭疼的蛋白質(zhì)保存問(wèn)題。


        一、為什么蛋白質(zhì)這么"嬌氣"?

        蛋白質(zhì)就像是個(gè)精致的樂(lè)高模型,靠著氫鍵、鹽鍵這些"膠水"維持著復(fù)雜的三維結(jié)構(gòu)。但隨便來(lái)個(gè)酸堿、高溫或者劇烈震蕩,這個(gè)模型就會(huì)散架。更氣人的是,純化后的蛋白比粗提物還要"作",動(dòng)不動(dòng)就變性給你看。


        二、保存蛋白質(zhì)的五大黃金法則

        1. 低溫保存:但別太低

        - 4℃適合短期(1周內(nèi)),但記得加抗菌劑

        - -20℃是常規(guī)選擇,但要注意凍融損傷

        - -80℃長(zhǎng)期保存最佳,但有些蛋白反而怕凍

        小貼士:像羧肽酶這種"玻璃心"蛋白,凍一次就變性;而有些酶凍融后活性反而增強(qiáng),簡(jiǎn)直是"抖M"體質(zhì)。


        2. 分裝是個(gè)技術(shù)活

        - 建議50-100μl/管(土豪實(shí)驗(yàn)室可以任性)

        - 標(biāo)記一定要清楚!別問(wèn)我是怎么知道的...

        - 用過(guò)的蛋白放4℃不要超過(guò)一周,對(duì)于較為重要的實(shí)驗(yàn)探索,最好用新鮮配置或未經(jīng)過(guò)反復(fù)凍融的蛋白質(zhì)。


        3. 濃縮才是精華

        - 濃度<1mg/ml的蛋白容易“自暴自棄"(解聚或吸附)

        - 疏水蛋白特別"粘人",喜歡抱管子不放

        - 酶溶液至少要>1%濃度


        4. 速凍速融要快準(zhǔn)狠

        - 液氮速凍較理想,干冰-乙醇浴也能湊合

        - 融化時(shí)37℃水浴快速搞定

        - 千萬(wàn)別學(xué)我那個(gè)把蛋白放室溫慢慢融化的師弟...


        5. 添加劑的選擇困難癥

        緩沖液:

        - pH7-8的Tris或PBS最保險(xiǎn)

        - 鹽濃度0-150mM為宜


        保護(hù)劑全家桶:

        - 甘油(10-50%):蛋白質(zhì)的"防凍液"

        - DTT:對(duì)抗氧化損傷的"抗氧化劑"

        - 蛋白酶抑制劑:防"自相殘殺"

        - 疊氮鈉:有毒但有效的"防腐劑"(做動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的請(qǐng)繞道)


        三、保存方法選擇指南

        1. 短期(<1周):

        - 4℃+過(guò)濾除菌

        - 記得定期檢查


        2. 長(zhǎng)期:

        - -80℃是較好的

        - 凍干保存較穩(wěn)定(但有些蛋白復(fù)溶困難)


        四、來(lái)自老法師的忠告

        1. 新純化的蛋白先做個(gè)小樣測(cè)試穩(wěn)定性

        2. 重要蛋白建議多種條件平行保存

        3. 記錄!記錄!記錄?。▌e問(wèn)我為什么強(qiáng)調(diào)三遍)

        4. 定期檢查保存蛋白的活性和濃度


        最后提醒:沒(méi)有放之四海而皆準(zhǔn)的保存方法,關(guān)鍵要了解你家蛋白的"脾氣"。多查文獻(xiàn),多試條件,才能找到適合的保存方案。祝大家的蛋白都能"長(zhǎng)命百歲"!


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