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產(chǎn)品分類(lèi) / PRODUCT
作為實(shí)驗(yàn)室的"打工人",相信大家都經(jīng)歷過(guò)這樣的崩潰時(shí)刻:好不容易純化出來(lái)的蛋白,放冰箱幾天后居然沉淀了!或者不同批次的蛋白活性忽高忽低,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)根本沒(méi)法看...今天我們就來(lái)聊聊這個(gè)讓老師們頭疼的蛋白質(zhì)保存問(wèn)題。
一、為什么蛋白質(zhì)這么"嬌氣"?
蛋白質(zhì)就像是個(gè)精致的樂(lè)高模型,靠著氫鍵、鹽鍵這些"膠水"維持著復(fù)雜的三維結(jié)構(gòu)。但隨便來(lái)個(gè)酸堿、高溫或者劇烈震蕩,這個(gè)模型就會(huì)散架。更氣人的是,純化后的蛋白比粗提物還要"作",動(dòng)不動(dòng)就變性給你看。
二、保存蛋白質(zhì)的五大黃金法則
1. 低溫保存:但別太低
- 4℃適合短期(1周內(nèi)),但記得加抗菌劑
- -20℃是常規(guī)選擇,但要注意凍融損傷
- -80℃長(zhǎng)期保存最佳,但有些蛋白反而怕凍
小貼士:像羧肽酶這種"玻璃心"蛋白,凍一次就變性;而有些酶凍融后活性反而增強(qiáng),簡(jiǎn)直是"抖M"體質(zhì)。
2. 分裝是個(gè)技術(shù)活
- 建議50-100μl/管(土豪實(shí)驗(yàn)室可以任性)
- 標(biāo)記一定要清楚!別問(wèn)我是怎么知道的...
- 用過(guò)的蛋白放4℃不要超過(guò)一周,對(duì)于較為重要的實(shí)驗(yàn)探索,最好用新鮮配置或未經(jīng)過(guò)反復(fù)凍融的蛋白質(zhì)。
3. 濃縮才是精華
- 濃度<1mg/ml的蛋白容易“自暴自棄"(解聚或吸附)
- 疏水蛋白特別"粘人",喜歡抱管子不放
- 酶溶液至少要>1%濃度
4. 速凍速融要快準(zhǔn)狠
- 液氮速凍較理想,干冰-乙醇浴也能湊合
- 融化時(shí)37℃水浴快速搞定
- 千萬(wàn)別學(xué)我那個(gè)把蛋白放室溫慢慢融化的師弟...
5. 添加劑的選擇困難癥
緩沖液:
- pH7-8的Tris或PBS最保險(xiǎn)
- 鹽濃度0-150mM為宜
保護(hù)劑全家桶:
- 甘油(10-50%):蛋白質(zhì)的"防凍液"
- DTT:對(duì)抗氧化損傷的"抗氧化劑"
- 蛋白酶抑制劑:防"自相殘殺"
- 疊氮鈉:有毒但有效的"防腐劑"(做動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的請(qǐng)繞道)
三、保存方法選擇指南
1. 短期(<1周):
- 4℃+過(guò)濾除菌
- 記得定期檢查
2. 長(zhǎng)期:
- -80℃是較好的
- 凍干保存較穩(wěn)定(但有些蛋白復(fù)溶困難)
四、來(lái)自老法師的忠告
1. 新純化的蛋白先做個(gè)小樣測(cè)試穩(wěn)定性
2. 重要蛋白建議多種條件平行保存
3. 記錄!記錄!記錄?。▌e問(wèn)我為什么強(qiáng)調(diào)三遍)
4. 定期檢查保存蛋白的活性和濃度
最后提醒:沒(méi)有放之四海而皆準(zhǔn)的保存方法,關(guān)鍵要了解你家蛋白的"脾氣"。多查文獻(xiàn),多試條件,才能找到適合的保存方案。祝大家的蛋白都能"長(zhǎng)命百歲"!
南京億迅生物科技有限公司出品的各類(lèi)蛋白,定制全長(zhǎng)蛋白,產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定,價(jià)格實(shí)惠,在國(guó)內(nèi)各科研院所和高校擁有良好的品譽(yù)。
該類(lèi)產(chǎn)品還有:重組人GDPD5蛋白,重組人EHD4蛋白,定制重組人WDR4蛋白(全長(zhǎng))等
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